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产品原理

        由于光学衍射的限制，标准激光扫描共聚焦显微镜的光学分辨率是240nm，而且价格昂贵。荷兰Confocal.nl的RCM（超高分辨多重扫描共聚焦显微镜）可安装在普通荧光显微镜的port上，利用RCM技术（Re-scan Confocal Microscopy，重扫共聚焦显微技术）为原显微镜增加一个共聚焦光路，得到超高分辨共聚焦图像（光学分辨率达到170nm，去卷积后达到120nm），图像更锐利，细节更明显。RCM还增加了灵敏度，信噪比是原来的4倍。样本平面激光强度仅nano-watt水平，可显著降低光毒性和光漂白性，适合长时间活细胞共聚焦成像。它在提升分辨率和灵敏度的同时，也可改进原显微镜的z-stack 3D切片功能，适合做3D共聚焦成像。

重扫共聚焦显微技术原理图：

可兼容的显微镜型号（以下为推荐型号，具体型号可咨询）：

产品特点

1.   结构特点：采用数字扫描技术，双向扫描，提高成像速度；搭配较大的光学元件，适合更高NA值的40X至100X的物镜，可得到宽阔的视野和明亮的图像。

2.   更好的信噪比：信噪比提升4倍，增加系统灵敏度。

3.   更高的灵敏度：微弱荧光强度的图像也可获取。

4.   更高的横向分辨率：分辨率提升1.4倍，重扫后达到超分辨率170nm，重扫+去卷积可达到120nm。图像更锐利，细节更明显。

5.   激光强度弱：样本平面的激光仅有nano-watt等级，光毒性和光漂白性极弱，适合做长时间活细胞成像。

6.   可做长时间活细胞成像：高分辨率、高灵敏度，且激光强度弱，长时间成像对细胞伤害小。

7.   扫描速度：图像大小为512x512像素时为2 fps（每秒2帧），一般扫描为5 fps（每秒5帧），最快可达到10 fps（每秒10帧）。

8.   改进3D切片成像功能：可用于多层扫描及3D影像构建。

9.   多达4个荧光通道：激发光分别为：405nm、488nm、561nm、640nm。

10.  无需图像后处理：为光路设计，在成像时即提供更高的分辨率和灵敏度，无需进行图像后处理，节省时间。

11.  用户友好型操作模式：短时间培训即可操作。

12.  开放型系统设计：升级您目前已有的显微镜，兼容多类图像处理软件。

13.  灵活的配置：可选择不同生产商的显微镜、相机和激光光源进行配置。

14.  性价比高：改造成本低廉，可利用您已有的显微镜和配件进行改造。

宽场成像和RCM成像的对比：

广泛的应用领域

适合同时要求高分辨率和高灵敏度的生物学应用，尤其适合低荧光强度的图像的获取，如单分子荧光原位杂交检测（smFISH）；可做类器官、斑马鱼胚胎、或更大的活性样本的深度3D成像和长时间活细胞成像。

1、具有超越普通共聚焦显微镜的分辨率

鹿皮肤成纤维细胞样本：从左到右分别是：大视野图片、放大的宽场图片、传统共聚焦图片、RCM技术处理的图片、Deconvolution（去卷积）处理的图片。可见RCM和“去卷积”技术都可以得到比传统共聚焦技术更好的分辨率和灵敏度。

2、2D细胞RCM成像

染色的共培养的神经元细胞：40x物镜（NA 1.4），红色：肌动蛋白（Actin）、品红色：MAP2、绿色：Tau，RCM2成像。

染色的果蝇心脏微管：40x物镜（NA 1.4），绿色：肌动蛋白（Actin）、红色：肌球蛋白重链、蓝色：微管蛋白（Alpha-tubulin），RCM2成像。

染色的HUVECs细胞：黄色：微管蛋白（Tubulin）、紫色：肌动蛋白（Actin）、蓝色：DNA，RCM2成像。

染色的BPAE细胞：40x物镜（NA 1.4），绿色：肌动蛋白（Actin）、红色：线粒体（Mitochondria）、蓝色：DNA，RCM2成像。

3、3D影像重建RCM成像

三维影像重建：处在有丝分裂过程中的Hela细胞。绿色：细胞骨架肌动蛋白（Actin）；红色：微管蛋白（Tubulin）；蓝色：细胞核，RCM1成像。

三维影像重建：观察老鼠囊胚里胚层细胞分布的状况，可以看到囊胚内部是中空的。绿色：原始内胚层marker：GATA4；红色：滋养外胚层marker：CDX2；蓝色：细胞核，RCM1成像。

三维影像重建：观察肿瘤球。蓝色：细胞核，RCM成像，去卷积处理。

4、长时间活细胞RCM成像

活细胞线粒体动态观察：10秒拍1张，拍摄了61hr6min，共22000张，最后观察到细胞还是存活的，还在分裂，说明激光对活细胞的毒性很小、伤害很小。